admin管理员组文章数量:1619283
2024年5月30日发(作者:)
双荧光素酶报告原理
双荧光素酶报告原理是一种常用的基因表达分析方法,其适用
于实时监测和定量分析基因的转录水平。该方法利用双荧光素
酶(Dual-Luciferase)报告基因系统,通过测量荧光信号的强
度来反映目标基因的表达情况。
该系统通常由两种荧光素酶组成,一种是火萤酶(Firefly
luciferase),另一种是海洋荧光素酶(Renilla luciferase)。实
验中,将目标基因的启动子区域与火萤酶基因或海洋荧光素酶
基因连接,然后转染到细胞中。当目标基因的转录水平发生变
化时,火萤酶或海洋荧光素酶基因也会受到影响。因此,通过
检测这两种荧光素酶的活性,可以间接反映出目标基因的表达
水平。
在双荧光素酶报告系统中,实验通常分为两个步骤。首先,加
入火萤酶底物(如D-luciferin),使火萤酶在酶催化下产生荧
光信号。然后,加入终止剂,使火萤酶反应停止,并加入海洋
荧光素酶底物(如coelenterazine),使海洋荧光素酶产生荧
光信号。通过荧光检测仪测量这两种荧光素酶的信号强度,可
以定量分析目标基因的表达水平。
值得注意的是,在实验设计中,常常会加入内参基因(如β-
actin),用以校正实验中的差异。内参基因是一个稳定表达的
基因,在实验中其转录水平不受处理的影响,可以作为表达平
衡的参考。通过将内参基因与目标基因共转染到细胞中,可以
通过内参基因的表达水平来校正目标基因的表达水平,提高实
验结果的准确性。
总的来说,双荧光素酶报告原理是通过测量火萤酶和海洋荧光
素酶的活性来间接反映目标基因的转录水平。该方法简单、灵
敏、可定量,广泛应用于基因表达研究和高通量筛选等领域。
版权声明:本文标题:双荧光素酶报告原理 内容由热心网友自发贡献,该文观点仅代表作者本人, 转载请联系作者并注明出处:https://www.elefans.com/xitong/1717047450a530247.html, 本站仅提供信息存储空间服务,不拥有所有权,不承担相关法律责任。如发现本站有涉嫌抄袭侵权/违法违规的内容,一经查实,本站将立刻删除。
发表评论