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2024年6月2日发(作者:)
文件名称:Pan T磁珠分选标准操作规程
文件编号:SOP-
版本/修订号:A/0
文件类型: SOP
起草部门:
起草人员:
起草日期:
发布日期:
颁发部门:
1. 目的
为规范磁珠分选T淋巴细胞,获取高纯度和高质量的T淋巴细胞。
2. 范围
适用于T细胞分选生产的操作过程。
3. 职责
3.1 生产部负责操作和清场。
3.2 质量管理部QA负责监督。
4. 仪器、试剂和耗材
4.1 仪器:生物安全柜;移液枪;离心机;细胞计数仪;QuadroMACS Starting kit(LS)
4.2 试剂:Pan T Cell Isolation Kit(Miltenyi);PBS;RPMI1640;台盼蓝;AB血清;
4.3 耗材:15/50mL离心管;25mL移液管;10mL移液管;
5. 标准操作程序
5.1 打开生物安全柜,紫外灯照射灭菌30min,通风10min后待用。
5.2 缓冲液配制:PBS加0.5%人AB血清和2mM EDTA,用前去气泡;缓冲液放4度冰
箱预冷。全程保持低温。
5.3安装:将支撑架和分离器用酒精消毒后,放入生物安全柜。将分离器平行贴到支撑架
的垂直面上,移动分离器调整高度。取出LS柱,安装到分离器的磁力槽中。
5.4 用细胞计数仪计数,计算细胞数目。
5.5 离心1000rpm,8min收集细胞,完全去掉上清。
5.6 按照每10
7
细胞加40ul buffer的量加缓冲液重悬细胞。
5.7 每10
7
细胞加10ul Pan T Cell Biotin-Antibody Cocktail。
5.8 混匀,4℃冰箱孵育5min。
5.9 每10
7
细胞加30ul 缓冲液。
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文件名称:Pan T磁珠分选标准操作规程
文件编号:SOP-
版本/修订号:A/0
5.10每10
7
细胞加20ul Pan T Cell Microbead。
5.11 混匀,4℃冰箱孵育10min。
5.12 加400 ul 缓冲液,混匀(至少500ul上柱)。
5.13 用3ml缓冲液润洗柱子。
5.14 把细胞悬液加入到柱子中。收集流出的T细胞。
5.15 用3ml缓冲液洗涤柱子,收集流出的T细胞。与5.14的合并。
5.16 从分离器上取下柱子,安放到合适的收集管中。
5.17 加入5ml 缓冲液到柱子中,立即将活塞插入柱子,用力将液体压出,即为非T细胞。
5.18 取样,台盼蓝染色后在细胞计数仪上计数。
5.19 关闭生物安全柜,进行清场操作。
5.20 填写相关记录文件。
6. 相关文件
无
7. 相关记录
7.1《T细胞分选生产记录》
8. 附件清单
无
9. 修订历史
内容
版本/修订号
生效日期
第 2 页
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