050-ACTH检验标准操作规程

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2024年6月1日发(作者：)

上海市XX医院检验科 ACTH检验标准操作规程 第 1 页 共 4 页

文件编号：sop-050

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ACTH检验标准操作规程

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1. 目的：用于体外定量测定人EDTA-血浆样本中促肾上腺皮质激素的含量

2. 适用机型：LIAISON分析仪。

3. 测定原理：采用免疫夹心化学发光检测方法。在磁微粒（固相）上包被有特异性的鼠单

克隆抗体（N-端），另一种单克隆抗体（针对ACTH的C-端碎片）与异鲁米诺衍生物结合

（异鲁米诺抗体结合物）在孵育过程中，校准液、样本或质控品中的ACTH与固相上的

单克隆抗体结合，然后异鲁米诺抗体结合物与已结合到固相的ACTH反应。孵育完毕后，

未结合的物质会被清洗移除，最后，加入启动试剂，引发瞬时化学发光反应，产生光信

号。通过光电倍增管测出的相对光单位(RLU)指示异鲁米诺-抗体结合物的数量，从而得

出校准品、样本或质控品中的ACTH的浓度。

4. 测定步骤：

4.1仪器测试准备：按LIAISON操作手册打开系统，进行每日使用前的维护。包括清洗、光

路检测等。

4.2样本的采集、原料及保存：

样本中的ACTH 分子降解速度很快，因此在处理样本时必须严格遵循以下要求。

必须使用冷冻储存的人EDTA血浆样本。

采用静脉穿刺方法采集血样并保存在含EDTA抗凝剂的硅化玻璃试管、真空采血管（紫

帽）或类似的容器里。避免溶血。样本采集后应立即将样本管置于冰浴中低温保存。

样本采集后120分钟内，使用冷冻离心机离心，并立即分装上清液。分装的上清液应保

存在塑料或硅化玻璃试管里并于-20 ° C或以下低温冷冻。每份分装的上清液的最小体积

为300L。

检测前，谨慎解冻混匀样本，检查是否有气泡并清除气泡。解冻的样本应置于2-8℃并

在6小时内用完。

高度溶血、高度脂血、含有颗粒物质或明显被微生物污染的样本不能用于检测。

禁止使用凝血样本。

避免反复冻融。任何没有用完的分装液都应该丢弃。

检测样本一次需要的最小量为 300 L (150 L 样本+ 150 L 保护体积)

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4.3试剂的准备：在揭开密封纸之前，先轻轻地水平摇晃试剂整盒（为了防止泡沫形成！）。

揭开密封纸，来回地转动磁颗粒区的小轮，直到悬浮液的颜色变成棕色。该步骤使磁颗

粒重新悬浮。将试剂盒放入仪器试剂区，等待30分钟。在此期间，磁颗粒自动地被搅

拌并完全地重新悬浮。

4.4定标: 该测试已经用国际参考标准NIBSC 1IRR 84/510校准。

通过测量定标物，预先定义的主曲线上的每个定标点将被调整（重新定标）为一个新的、

仪器特异的测量水平。

以下情况需要定标：每改变一次批号（指试剂整盒或者激发试剂而言），每过一星期或

每使用一个新的试剂盒， LIAISON分析仪的每次维护之后， 当质控值不在期望范围之

内时，房间温度的变化超过5℃时。

4.6质控：请使用适当的质控作为内部质控。

4.7测试：严格按照LIAISON分析仪的操作说明操作。每一个测试参数都由试剂盒上的条形

码识别。需要进一步的信息请参考LIAISON操作手册。

反应步骤：

150µl 样本，定标物或质控

+ 200µl 示踪物

+ 20µl 磁颗粒

20min 温育，洗涤

3 s 测量

4.8结果计算：LIAISON分析仪借助于由主曲线两点定标而得到的一条定标曲线，自动地计

算每一个样本的ACTH浓度，结果以pg/ml表示。转换因子：1pg/ml等于0.2202pmol/l.

需要更进一步的信息请参考LIAISON用户手册。

5.结果说明

5.1参考范围

测量范围：分析仪直接计算ACTH浓度，其浓度范围为1.6 — 1500 pg/mL。1 pg/mL相当

于0.2202 pmol/L。

基础参考范围：为了评估LIAISON®ACTH 的参考范围，我们采集了589个欧洲个体样本送

往实验室进行ACTH相关的临床研究。这些样本（男= 270，女= 313，不明= 6）在使用参考

方法检测后被归类为正常个体样本。

研究结果：中间值为16.3pg/mL，ACTH基础参考值范围为4.7—48.8pg/mL（分别为5％

-95%可信区间）。每个实验室应建立自己的基础参考值范围。

临床样本：我们同时对51个病理样本作了临床研究，正常样本和病理样本的统计分析

结果如下表所示：

对正常人群和垂体-肾上腺患者共640例样本的临床ACTH水平的示例如下图。

st

上海市XX医院检验科 ACTH检验标准操作规程 第 3 页 共 4 页

临床症状 样本数 平均值 标准差

2.5

th

%

中值

97.5

th

%

pg/mL pg/mL

pg/mL

(50

th

%)

pg/mL

pg/mL

15 10.3 15.0 2.5 6.7 46.6

9 219.1 157.3 62.8 134.3 437.0

8 424.6 489.9 143.7 187.7 1381.0

12 116.8 64.7 52.0 103.1 236.1

4 729.8 625.9 165.2 632.1 1460.0

3 298.1 67.7 225.9 337.1 337.3

589 16.3 14.6 3.6 16.3 60.5

最小值 最大值

pg/mL pg/mL

2.4

59.4

139.0

50.0

155.0

220.0

1.4

63.0

450.0

1500.0

240.0

1500.0

337.0

106.1

地塞米松抑制试验（ST）

爱迪森氏症（AD）

异位ACTH综合症（ES）

库欣氏综合症（CS）

纳尔逊(氏)综合症（NS）

窦岩导管插入术（SPC）

正常样本（N）

6.试剂的保存

试剂盒

- 密封状态下：2-8°C条件下保存至失效期。

- 打开密封膜后或2-8°C：至少可稳定储存2周。

2周后，若质控值仍在靶值范围内，试剂盒仍可使用。

- 若试剂盒已开封，必须使用同一台化学发光仪进行检测。

- 不能冷冻。

- 为方便以后使用时磁微粒的重新悬浮，试剂盒必须直立放置。

- 避免直射光线。

校准品

- 冻干粉：2-8°C条件下保存至失效期。

- 配制后：2-8°C 保存3天。

- 配制后冷冻：-20°C可保存1个月。

促肾上腺皮质激素分子在液体中抗热稳定性差：重新配制后的校准品置于室温的时间不

能长于在LIAISON®仪器上操作需要的时间。

重新配制的校准品溶液必须立即分装转移到系列塑料或硅化玻璃试管里并低温冷冻保

存。

溶解后的校准品必须在当日全部用完。分装的最小体积为 600 L (450 L 定标液+ 150

L 死体积)。

分装的每份校准品仅允许一次冷冻和溶解。

校准品处理过程中，采用适当的预防措施避免细菌污染

7. 分析方法的局限性

此试剂盒只能用于在LIAISON®分析仪。

试剂盒组分不能拆分。

过效期的试剂盒不能使用。

可靠的结果依赖熟练的技术人员和严格的操作程序。

细菌污染或热灭活的样本可能影响实验结果。

检测结果在正常值范围内并不能排除肾上腺皮质功能失常，必须结合其它诊断程序一起

做出判断。

检测结果以定量形式报告。但是，不能根据单次的检测结果来判断是否患有疾病，而应

该结合临床观察结果和医学判断来下结论。每个治疗方案都应基于个体案例来决定。

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LIAISON®ACTH 检测是在分析物完整和不变状态下进行的。分子降解成碎片会改变抗体结

合特性，影响最终检验结果。由于此类样本的分子状态的改变会对试剂中特定的抗体结合有

影响，故用不用的检测试剂测试可能会得到不一致的结果。

即使样本中加入了HAMA中和试剂，极高浓度的HAMA（人抗鼠抗体）仍可能会影响检测

结果。

样本中ACTH水平超出测量范围的样本可用LIAISON®内分泌稀释液（产品代号：319133）

预先稀释后

再测量。

8.警告及预防措施

-此试剂盒用于检测冷冻的EDTA样本。其基础参考值范围和所有性能数据都是基于冷冻

的EDTA血浆样本而得到的。如果使用新鲜采集样本，每个实验室应建立自己的预期值范围。

- 遵守处理所有实验试剂的一般性预防措施

- 应该按照当地法律准则废弃所有的废物

- 所有试剂中包含的人血清均用免疫测试检测过，没有发现与乙肝表面抗原，以及抗

HIV1、HIV2、HCV的抗体的交叉。然而，没有哪种测试方法能完全保证没有包含这些

病毒。因而，试剂盒成分与病人血清均应被视为具有潜在的传染性，应在有充分的预

防措施的条件下操作。

- 安全数据表一经要求即可提供。

8.参考文件：

8.1《LIAISON分析仪用户手册》

8.2 LIAISONC-P检测试剂使用说明书

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