槟榔药材高效液相色谱指纹图谱研究_图文

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2024年3月17日发(作者：)

药物鉴定　

槟榔药材高效液相色谱指纹图谱研究木　２０１１年第２０卷第ｌ９期　

丁野，姚蓉，龙海燕，李文莉　

（湖南省药品检验所，湖南长沙　４１０００１）　

摘要：目的建立槟榔药材高效液相色谱指纹图谱的分析方法。方法采用反相高效液相色谱法进行色谱分离，使用相似度评价软件进行数　

据处理，对不同产地的槟榔药材指纹图谱的相似度进行比较分析。结果以氢溴酸槟榔碱为参照峰，确定了３个共有峰，建立了１４批药材　

的共有图谱。结论所建立的高效液相色谱指纹图谱分析方法稳定、重复性好，为槟榔药材质量控制提供了更全面的信息。　

关键词：槟榔；指纹图谱；反相高效液相色谱法　

中图分类号：Ｒ２８４．１；Ｒ２８２．７１　文献标识码：Ａ　文章编号：１００６—４９３１（２０１１）１９—００２２—０２　

Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ＨＰＬＣ　Ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ　ｏｆ　Ａｒｅｃａ　Ｓｅｍｅｎ　

Ｄｉｎｇ　Ｙｅ，Ｙａｏ　Ｒｏｎｇ，　Ｈａｉｙａｎ，Ｌｉ　Ｗｅｎｌｉ　

Ｉ　Ｈｕｎａｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｆｏｒ　Ｄｒｕｇ　ｃｏｎｔｒｏｌ　Ｃｈａｎｇｓｈａ，Ｈｕｎａｎ　Ｃｈｉｎａ　４１０００１）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ＨＰＬＣ　ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ　ｏｆ　Ａｒｅｃａ　Ｓｅｍｅｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ＲＰ—ＨＰＬＣ　ｗａｓ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ　ｓｅｐｅｒ—　

ａｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄａｔａ　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｓｅｄ　ｂｙ　ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｓｏｆｔｗａｒｅ　ｔｏ　ｃｏｍｐａｒｅ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｏｆ　Ａｒｅｃａ　ｓｅＨｂｅｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｒｅｅ　ｃｏｍｍｏｎ　ｐｅａｋｓ　

ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｉｅｄ　ｉｆｎ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ　ｗｉｔｈ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｔｏ　ａｒｅｃｏｌｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｂｒｏｍｉｄｅ　ｐｅａｋ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　１４　ｂａｔｃｈｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　

ＨＰＬＣ　ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｓｔａｂｌｅ　ａｎｄ　ｒｅｐｅａｔａｂｌｅ，ｗｈｉｃｈ　ｃａｎ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｍｏｒｅ　ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　Ａｒｅｃａ　ｓｅｍｅｎ．　

Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ａｒｅｃａ　ｓｅｍｅｎ；ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ；ＲＰ—ＨＰＬＣ　

槟榔居我国著名四大南药之首，原产于马来西亚，我国主产于　

海南、台湾、云南河口以及西双版纳热带雨林间，广西、广东和福建　

仅有少量的分布”１。槟榔含生物碱、鞣质、脂肪酸、氨基酸类等成　

分，其中生物碱是主要的保健和药理活性成分之一１　２　１。目前国内　

外已对槟榔生物碱的提取分离、成分鉴定、含量测定和药理效应方　

面进行了深入的研究　Ｊ，但未见有指纹图谱方面的报道。笔者采　

称定质量，超声处理（３００　Ｗ，３０　ｋＨｚ）１５　ｍｉｎ，放冷，再称定质量，用　

５０％乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，即得供试品溶液。　

２．３方法学考察　

精密度试验：取同一份供试品溶液，连续进样６次，依法测定。　

结果各共有峰相对保留时间的ＲＳＤ为０．０８％～０．１０％，相对峰面　

积的ＲＳＤ为１．９％～２．６％。　

用反相高效液相色谱法建立了槟榔的高效液相色谱指纹图谱分析　

方法，为其质量控制提供了更全面的信息。　

１　仪器与材料　

重复性试验：取同一批药材，依法制备６份样品并进行检测。　

结果各共有峰相对保留时问的ＲＳＤ为０．０６％～０．０９％，相对峰　

面积ＲＳＤ为１．３％～１．９％。　

安捷伦１２００型高效液相色谱仪，Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎ色谱工作站，　

ＫＱ一３００ＤＥ超声清洗仪。氢溴酸槟榔碱对照品（中国药品生物制品　

检定所，批号为１１１６８４—２００４０１）；甲醇为色谱纯，水为纯净水，其他　

均为分析纯；试验中所用药材均经作者鉴定为槟榔Ａｒｅｃａ　ｃａｔｅｃｈｕ　Ｌ．　

的干燥成熟种子，药材来源见表１。　

表１　样品信息表　

序号　

Ａ　

Ｂ　

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于０，２，４，８，１２，２４　ｈ时　

进样，记录色谱图。结果各共有峰的相对保留时间ＲＳＤ为０．３７％～　

０．４６％、相对峰面积ＲＳＤ为２．９％～４．５％，表明供试品溶液在　

２４　ｈ内基本稳定。　

２　４　指纹图谱建立　

对１４批样品的指纹图谱进行分析，选择稳定性好、吸收较强、　

样品名称　产地　

云南　

云南　

样品名称　

槟榔　

产地　

海南　

序号　

Ｈ　

Ｉ　

特征比较明显的色谱峰作为共有峰，其中１号峰保留时间与氢溴　

酸槟榔碱保留时间一致，作为参照峰，共标定了３个共有峰。利用　

国家药典委员会开发的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统　

２００４Ａ版》软件生成指纹图谱共有模式，并计算上述ｌ４批药材指　

纹图谱的相似度。参数设置：剪切溶剂峰０～５　ｍｉｎ，对照图谱生成　

方法为中位数法，时间窗宽度为０．２　ｍｉｎ，自动匹配。生成的标准指　

槟榔　

槟榔　槟榔（饮片）　广西　

ｃ　

Ｄ　

槟榔　

槟榔　

海南　

海南　

Ｊ　

Ｋ　

槟榔（饮片）　

槟档Ｆ（饮片）　

云南　

云南　

Ｅ　

Ｆ　

Ｇ　

槟榔　

槟榔　

槟榔　

海南　

缅甸　

印度尼西亚　

Ｌ　

Ｍ　

Ｎ　

槟榔　

槟榔　

槟榔　

海南屯昌　

广西　

海南　

纹图谱共有模式以及１４批样品的高效液相色谱指纹图谱见图ｌ　

ｍＡＴＩ　

２　方法与结果　

２　１　色谱条件　

色谱柱：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ　ＯＤＳ一３　Ｃｌ　８柱（２５０　ｍｍ×４．６　ｍｍ　ｘ　５　ｍ）；流　

动相：０．１５％三乙胺溶液（磷酸调节ｐＨ至６．５）一甲醇（８７：１３）；流　

速：１．０　ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长：２１５　ｎｌｎ；柱温：３０℃；进样量：５　Ｌ。　

２　２　溶液制备　

取氢溴酸槟榔碱对照品适量，精密称定，加５０％乙醇制成每　

１　ｍＬ含５０　ｇ的溶液，即得对照品溶液。取本品粉末（序号Ａ，过５　

号筛）约０．２　ｇ，精密称定，置锥形瓶中，精密加入５０％乙醇２５　ｍＬ，　

７７　４０　

品溶液　

３８．５５　

Ｏ．３８　

０　５．８Ｏ　１１　５９　１７．３９　２３．１８　２８　９８　３４．７８　４Ｏ　５７　

１．氢溴酸槟榔碱　

图１　槟榔药材标准指纹图谱及参照物色谱图　

国家“十一五”重大科技支撑计划“重大新药创制”课题，项目编号：２００９ＺＸ０９３０８—００１—３。　

・

２２・　

中国药业Ｃｈｉｎａ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ　

２０１１年第２０卷第ｌ９期　

高效液相色谱法测定普瑞巴林胶囊的含量　药物鉴定　

肖健，曹杨远　

（福建卫生职业技术学院食品药品研究所，福建福州　３５０１０１）　

摘要：目的建立测定普瑞巴林胶囊含量的高效液相色谱法。方法采用ｃ　ｓ色谱柱（１５０　ｍｍ×４．６　ｍｍ，５　ｍ），流动相为甲醇一乙腈一ｐＨ＝　

７．０的２０　ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液（４００：１５０：４５０），流速为１．０　ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长为２１０　ｎｍ，柱温为３５℃。结果普瑞巴林质量浓度在　

５９８．８～１　３９７．２￣ｇ／ｍＬ范围内与峰面积呈良好线性关系，ｒ＝０．９９９　７，平均回收率为９９．８０％，ＲＳＤ为１．５７％（ｎ＝９）。结论该方法操作　

简便、专属性强，可用于普瑞巴林胶囊的质量控制。　

关键词：普瑞巴林；高效液相色谱法；含量测定　

中图分类号：Ｒ９２７．２；Ｒ９７１　．６　文献标识码：Ａ　文章编号：１００６—４９３１（２０１１）１９—００２３—０２　

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｒｅｇａｂａｌｉｎ　Ｃａｐｓｕｌｅｓ　ｂｙ　ＨＰＬＣ　

Ｘｉａｏ　Ｊｉａｎ，Ｃａｏ　Ｙａｎｇｙｕａｎ　

ｆ　ｌｎｓｔｉｔｕｄｅ　ｆｏｒ　Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ｄｒｕｇ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｆｕｊｉａｎ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ，Ｆｕｚｈｏｕ，Ｆｕｊｉａｎ，Ｃｈｉｎａ　３５０１０１　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａｎ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　Ｐｒｅｇａｂａｌｉｎ　Ｃａｐｓｕｌｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｕｓｉｎｇ　Ｃｌ　ｓ　ｃｏｌｕｍｎ（１５０　ｍｉｌｌ　ｘ　４．６　ｍｍ，５　Ｉｘｍ），　

ａ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｏｆ　ｍｅｔｈａｎｏｌ—ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ一２０　ｍｍｏｌ／Ｌ　ａｎｄ　ｐＨ＝７．０　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｂｕｆｆｅｒ（４００：１５０：４５０），ｌｆｏｗ　ｒａｔｅ　ｏｆ　１．０　ｍＬ／ｍｉｎ，ｔｈｅ　ｄｅ—　

ｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　２１０　ｎｌｎ，ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　３５℃．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｐｒｅｇａｂａｌｉｎ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　５９８．８～１　３９７．２　Ｉｘｇ／ｍＬ　

ｓｈｏｗｅｄ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒｉｔｙ　ｗｉｔｈ　ｐｅａｋ　ａｒｅａ，ｒ＝０．９９９　７，ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｐｒｅｇａｂａｌｉｎ　Ｃａｐｓｕｌｅｓ　ｗａｓ　９９．８０％，ＲＳＤ　ｗａｓ　

１．５７％（ｎ＝９）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ，ｓｐｅｃｉｉｆｃ，ａｎｄ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　Ｐｒｅｇａｂａｌｉｎ　Ｃａｐｓｕｌｅｓ．　

Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｐｒｅｇａｂａｌｉｎ；ＨＰＬＣ；ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　

普瑞巴林（ｐｒｅｇａｂａｌｉｎ，ＰＧＢ）的化学名为（Ｓ）一（＋）一３一氨甲　大、安全有效的抗癫痫药物。目前普瑞巴林的含量测定方法有紫外　

基一５一甲基己酸，是美国辉瑞公司研究开发的一种　一氨基丁酸　

光谱法和荧光光谱法　、高效液相色谱紫外检测法　、高效液相　

（ＧＡＢＡ）受体阻滞剂，用于治疗部分癫痫发作，其作用机制是通过　色谱荧光检测法”　以及高效液相色谱一质谱法　］。笔者采用高效　

抑制中枢神经系统电压依赖性钙通道的一种仪ｚ一　亚基蛋白，减　液相色谱法紫外检测法测定了普瑞巴林胶囊的含量，现报道如下。　

少神经末梢的去极化，减少ｃａ　内流，从而减少兴奋性神经递质的　

１　仪器与试药　

释放…。普瑞巴林的治疗指数高，不良反应少，是一种市场潜力巨　Ａｇｉｌｅｎｔ　１１００型高效液相色谱仪，Ｎ２０００型色谱工作站（浙江大　

和图２。计算的相似度值见表２。　

０．１５％三乙胺溶液（磷酸调ｐＨ至６．５，１３：８７）为流动相所得色谱　

２２７　９８　

图分离度好，基线平稳。通过相似度评价软件计算，１４批槟榔药材　

指纹图谱相似度均大于０．９，表明不同产地的槟榔药材的生物碱类　

ｌ７Ｏ．７７　

成分具有较大程度的相似性。　

参考文献：　

１１３　５６　

［１］南京药物学院药材教研组．药材学［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，１９９４：　

１　０４ｌ—ｌ　０４５．　

［２］中秀丽，段亮亮．槟榔的化学成分及药理研究进展［Ｊ］．宜春学院学　

５６．３５　

报，２００９，３１（２）：９５—９７．　

［３］张春，吕飞杰，陶海腾．槟榔活性成分及其功能作用的研究进展［Ｊ］．　

０　８６　

中国食物与营养，２００８（６）：５０—５３．　

图２　ｌ４批槟榔药材指纹图谱　

［４］胡四琴，徐仿周，高文平，等．槟榔生物碱提取分离及检测方法的研究　

表２　相似度结果表　

进展［Ｊ］．中药材，２００９，３２（２）：３０８—３１１．　

序号　相似度　序号　相似度　序号　相似度　

［５］陈浩桉，赖宇红，王晓钰，等．高效阳离子交换色谱法测定槟榔中槟榔　

Ａ　０．９４８　Ｆ　０．９９９　Ｋ　０．９９６　

碱的含量［Ｊ］．中药材，２００２，２５（１）：２７—２８．　

Ｂ　０．９６６　Ｇ　０．９９９　１　０・９９４　

［６］杨春，苏少忠，徐杏云，等．ＲＰ—ＨＰＬＣ法测定胃通颗粒中槟榔碱的含　

Ｃ　０．９６５　Ｈ　０．９９４　Ｍ　０．９９７　

量［Ｊ】．中国中药杂志，２００３，２８（５）：４５９—４６０．　

Ｄ　０．９７３　１　０．９８５　Ｎ　０．９９４　

［７］Ｃｏｘ　Ｓ，Ｐｉａｔｋｏｖ　Ｉ，Ｖｉｃｋｅｒｓ　ＥＲ，ｅｔ　ａ１．Ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏ—　

Ｅ　０．９７０　Ｊ　０．９９６　

ｇｒａｐｈｉｃ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｒｅｃｏｌｉｎｅ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｓａｌｉｖａ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ　Ａ，　

２００４，１　０３２（１—２）：９３—９５．　

３　讨论　

［８］Ｓｕｚｕｋｉ　Ｈ，Ｈａｒａｄａ　Ｍ，Ｓａｔａｋｅ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｒｅｃｏｌｉｎｅ　ａｎｄ　

在选择提取溶剂时，分别考察了水、７５％乙醇、５０％乙醇、２５％　

ａｒｅｃａｉｄｉｎｅ　ｉｎ　ａｒｅｃａ　ｂｙ　ｒｅｖｅｒｓｅｄ—ｐｈａｓｅ，ｉｏｎ—ｐａｉｒ　ｈｉｇｈ—ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　

乙醇、无水乙醇，结果表明，除无水乙醇提取所得色谱图峰形较差　

ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ［Ｊ］．Ｎａｔ　Ｍｅ誊１９９５，４９（３）：３０３—３０７．　

外，其他溶剂所得色谱图峰形均较好且所得色谱峰数量相同，而以　

［９］徐丽华，崔丽华，刘　群．药材粒度及提取方法对槟榔含量测定结果的　

５０％乙醇提取率最高，故选择５０％乙醇为提取溶剂。考察了不同流　

影响［Ｊ］．药物分析杂志，１９９８，１８（４）：２６３—２６４．　

动相对供试品溶液的分离效果，经过反复试验，结果以甲醇一　

（收稿日期：２０１０—１２—１７）　

中国药业Ｃｈｉｎａ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ　

・

２３・　

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