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2024年6月4日发(作者：)
中国应用生理学杂志，２０２１，３７（５）
４５９
３８（９）：１９８６１９９６．
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：Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｔａｒｇｅｔｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ
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β
２／３／４ａｃｔｉｖａｔｉｏｎｐｒｏｍｏｔｅｓＲＥＬＭｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｔｏｍｏｄ
β
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ｕｌａｔｅｔｈｅｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｉｎｈｕｍａｎ
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β
ｏ
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α
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ｌａｔｉｏｎｏｆｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｔｏｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｉｎｃｈｒｏｎｉｃ
ｈｅａｒｔｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．ＡｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒＴｈｒｏｍｂＶａｓｃＢｉｏｌ，２０１８，
利用全细胞膜片钳技术记录大鼠脑片ＮＭＤＡ电流的研究
，２，２，２，２，２，２，２，２，２
△
黄燕云
１
，高 洁
１
，张利娜
１
，杜相欣
１
，张雨彤
１
，郭 霞
１
，郝 娜
１
，李建国
１
，张 宇
１
（１．细胞生理学教育部重点实验室，２．山西医科大学生理学系，太原０３０００１）
【摘要】 目的：采用全细胞膜片钳技术记录大鼠脑片实验中ＮＭＤＡ电流，并介绍诱发ＮＭＤＡ电流的自制刺激电极制作方法。方
分别通过含受体激动剂ＮＭＤＡ的孵育液灌流和电刺激诱发ＮＭＤＡ电流两法：在大鼠目标脑区快速取材并获取活性良好的脑片，
种方式进行膜片钳记录；利用针灸针自制刺激电极。结果：通过记录到大鼠脑片神经元的ＥＰＳＣ和ＡＰ可判断神经元的状态，比
ＭＤＡ电流幅度，即直接灌流受体激动剂ＮＭＤＡ（２８２．０±２４．３）ｐＡ和自制刺激电极诱发（２６１．４±４０．１）ｐＡ，二较两种方法诱导的Ｎ
＝
者电流幅度无明显差异（Ｐ＞０．０５，ｎ４）；自制刺激电极与进口刺激电极诱发的ＮＭＤＡ电流幅度分别为（２６７．２±３６．５）ｐＡｖｓ（２３９．２
＝
±４１．０）ｐＡ，二者电流幅度无明显差异（Ｐ＞０．０５，ｎ４），证明自制刺激电极成功。结论：大鼠脑片实验中，通过直接灌流激动剂与
ＭＤＡ电流，自制刺激电极为在脑片上记录诱发电流提供了一种经济、可靠的实验手段，便于各实验室电刺激两种方式均可诱导Ｎ
应用。
【关键词】 脑片膜片钳；ＮＭＤＡ电流；灌流给药；电刺激；大鼠
【ＫＥＹＷＯＲＤＳ】 ｂｒａｉｎｓｌｉｃｅｐａｔｃｈｃｌａｍｐ； ＮＭＤＡｃｕｒｒｅｎｔ； ｐｅｒｆｕｓｉｏｎａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ； ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ； ｒａｔ
【中图分类号】Ｒ３３８．８ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１０００６８３４（２０２１）０５４５９００４
【ＤＯＩ】１０．１２０４７／ｊ．ｃｊａｐ．６０５３．２０２１．０５７
膜片钳技术在１９７６年由德国科学家Ｎｅｔｈｅｒ和Ｓａｋｍａｎｎ
【基金项目】国家自然科学基金项目（８１３７１２５４）；山西省
‘１３３１工程’重点学科建设计划经费（ＸＫ２０１７０８）；山西省自然
科学基金（２０１８０１Ｄ１２１３１８）
【收稿日期】２０２００３２３【修回日期】２０２１０２０７
△
【通讯作者】Ｔｅｌ：（０３５１）４１３５５６０或３９８５１６３；Ｅｍａｉｌ：ｚｈｙｕｃｎｍ
＠１６３．ｃｏｍ
发明，他们首次在青蛙肌细胞上用双电极钳制膜电位的同时
１］
。这种技术通过记录到乙酰胆碱激活的单通道离子电流
［
记录细胞膜上单个或几个离子通道开放或关闭引起的电流
变化来研究细胞生理功能，已被广泛应用于生命科学领域，
尤其是神经科学的许多方面。如记录在脑内功能活动时神
４６０
经元兴奋性的变化，神经信号的产生和传导，神经环路中突
２６］
。全细胞记录模式下可以获得细触的传递过程等研究中
［
ＣｈｉｎＪＡｐｐｌＰｈｙｓｉｏｌ，２０２１，３７（５）
孵育液配方（ｍｍｏｌ／Ｌ）：ＫＣｌ２．５，ＣａＣｌ，ＮａＨＰＯ
２
２
２４
１．２５，ＮａＣｌ１２４，ＮａＨＣＯ６，Ｇｌｕｃｏｓｅ１０，渗透压为３００～３０５
３
２
ｍｍＨｇ，ｐＨ７．３～７．４。
电极内液配方（ｍｍｏｌ／Ｌ）：ＫＧｌｕｃｏｎａｔｅ１２０，ＫＣｌ５，
ＨＥＰＥＳＫ１０，ＥＧＴＡ５，ＣａＣｌ．５，ＭｇＳＯ，Ｎａｐｈｏｓｐｈｏｃｒｅａ
２
０
４
２
２
，ＮａＡＴＰ５，ＮａＧＴＰ４，ＭｇＡＴＰ４，渗透压为２９０～３００ｔｉｎｅ５
２３
，ｐＨ７．３５～７．４５。ｍｍＨｇ
１．５ 组织切片制备
切片液，孵育液均需提前通入混合气（９５％Ｏ％
２
＋
５
ＣＯ）至饱和。取切片液２００ｍｌ左右，置于孵育盒中预先冰
２
冻至冰水混合状（内含小冰晶），另取一个孵育盒倒入适量孵
育液室温放置并持续通气。用１％戊巴比妥钠腹腔麻醉后断
头，快速取脑组织放到提前准备好的冰冻切片液中。培养皿
中放滤纸，滴加切片液，脑组织放在滤纸上，吸干水分的同时
用刀片修整脑组织，切取实验需要部位，周围用溶好的琼脂
包埋，切片厚度为２００～３００
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