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Sulfo CY3
Sulfo CY3-DBCO是一种荧光标记剂,可以通过点击化学方法将其与蛋白质特异性地标记。以下是一种常见的Sulfo CY3-DBCO蛋白质标记的方法:
实验步骤:
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制备目标蛋白质:准备并提取您感兴趣的蛋白质。这可以通过细胞培养、细胞溶解、组织切割等方法来获取蛋白质。
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蛋白质纯化:对蛋白质进行纯化以去除杂质。您可以使用适当的蛋白质纯化方法,如亲和层析或离子交换层析。
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测定蛋白质浓度:使用适当的方法测定蛋白质的浓度,例如BCA法或Bradford法。
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还原蛋白质:使用还原剂(例如DTT),将蛋白质还原为其自由巯基状态。这有助于点击化学反应的进行。
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连接DBCO官能团:使用DBCO-PEG-NHS或类似的连接剂,将DBCO官能团引入蛋白质分子中。这可以通过简单的反应来实现,将DBCO-PEG-NHS加入蛋白质溶液中,并在室温下搅拌数小时。
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去除未反应的连接剂:使用蛋白质浓缩装置或其他合适的方法,去除未反应的连接剂,同时将蛋白质浓缩。
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标记蛋白质:将Sulfo CY3-DBCO染料溶解在DMSO中,然后将其加入到已经修饰的蛋白质溶液中。让反应在室温下进行,以确保特异性标记。
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反应停止:在适当的时间后,通常在15-60分钟之间,加入适当的成分来停止点击化学反应。这可以是胺基化合物(例如甘氨酸或甘胺)。
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去除未反应的染料:使用蛋白质浓缩装置或其他方法去除未反应的染料,并将蛋白质浓缩。
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测定标记效率:使用分光光度计或荧光光谱仪测定标记的蛋白质的浓度和荧光强度,以评估标记效率。
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应用:使用标记的蛋白质进行您的实验,例如荧光显微镜成像、流式细胞仪分析、免疫印迹、酶联免疫吸附实验(ELISA)等。
请注意,在进行这些实验时,根据您的具体研究需求和实验条件,可能需要对实验进行一些优化和验证。
CY5 NHS ester
CY3 COOH
ICG-Hydrazide
Sulfo-CY3 maleimide
CY3 amine
Sulfo-CY3 COOH
ICG-Hydrazide
ICG-DBCO
Sulfo-CY3 NHS ester
Sulfo-CY7 maleimide
CY5 maleimide
CY5 DBCO
Sulfo-CY5 DBCO
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