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worthington细胞分离技术之worthington细胞定量优化

大家都知道细胞分离优化技术有很多方案，前面我们讲了一般准则和优化策略这2个方面。那么接下来一起看看艾美捷worthington的细胞定量优化技术吧~

艾美捷worthington优化技术：细胞定量

为了有效地评估每个程序，量化每个解离步骤的结果非常重要。建议使用细胞计数室（血细胞计数器）进行产量定量，并使用台盼蓝进行活力定量。概述了使用血细胞计数器进行细胞产量定量；但是，此程序的新手可以参考更详细的讨论（参见 Freshney，动物细胞培养，第 227 页）。

艾美捷worthington细胞定量所需用品：

改进的 Neubauer 血细胞计数器

细胞兼容培养基或 BSS

巴斯德移液器或微量移液器

显微镜 (10X)

柜台

艾美捷worthington细胞定量程序：

1.用 70% 异丙醇仔细清洁计数室表面和血细胞计的盖玻片，并使其风干。小心不要刮伤这些表面。

2.用试剂级水润湿盖玻片的侧面，并将盖玻片对准计数室。

3.使用巴斯德移液器或微量移液器取充分混合的 20-50 µl 等分的解离细胞悬液，仅将细胞吸入尖端。通过将移液器的尖端放在腔室边缘并让腔室通过毛细作用完全充满，立即将细胞悬浮液转移到计数室。不要过度或不足填充腔室。

4.对血细胞计数器另一侧的第二个腔室使用另一个等分样品重复此过程。

5.将血细胞计数器放在显微镜台上，并使用计数插图10X 物镜，专注于计数室网格线。根据需要调整对比度以清楚地看到网格和分散的单元格。

6.通过缓慢移动滑块来调整字段区域，以获得由三条线包围的中心网格（见下图）。计算此 1 mm 2区域中存在的单元格总数，包括位于顶部和左侧边界上的单元格，不包括位于右侧和底部边界上的单元格。

7.为了准确计数至少 100-500 个细胞。根据产量和密度，可以计算更多或更少的面积。

8.重复第二个室的计数。如果不存在第二个腔室，则应清洁载玻片并重复该过程。

计算：

C = Ñ x 10 4

其中 C = 每毫升细胞数

Ñ = 计数细胞数的平均值

10 4 = 1 mm 2的体积转换系数

总产量 = C x V

其中 V = 细胞总体积 (ml)

例子：

计数1 = 183 个细胞/mm 2

计数2 = 175 个细胞/mm 2

细胞体积 = 55 ml

C = 178.5 x 10 4 = 1,785,000 个细胞/ml

总产量 = C x V = 1785,000 x 55 = 98,175,000 个细胞

注意：为获得最佳效果，细胞密度应至少为每毫升10 5 个细胞。常见错误是由于在取样前细胞悬浮液混合不当和/或在装载血细胞计数器计数室之前允许细胞在移液管中沉淀。避免对多个细胞聚集体进行计数；聚集体的存在表明解离不完全，这可能需要进一步优化分离参数。单细胞悬液提供最佳结果。