一.下载质粒图谱
- SnapGene官网：https://www.snapgene/
下载好的载体图谱按Ctrl + 或者Ctrl - 可进行放大或缩小
SnapGene的使用
1.打开DNA序列
2.左侧功能栏介绍
3. 酶切酶连
1.选择载体的酶切位点并复制，在基因CDS上查找检测没有的话可选该酶切位点
2.CDS引物设计
【1】长度15-30bp
【2】GC含量40-60%
【3】Tm上下游最好不要超过2℃
方法一：
方法二：添加粘性末端
4.模拟琼脂糖凝胶电泳
5.同源重组
有时候找不到合适的限制性内切酶，切酶切酶连效率不高，此时用无缝克隆，对载体进行线性化，重组酶同源重组即可
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